CRISPR/Cas9基因編輯是如何工作的？
當(dāng)gRNA和Cas9在一個(gè)細(xì)胞中一起表達(dá)時(shí)，gRNA:Cas9復(fù)合體被招募到靶基因序列中，該序列位于被稱為PAM的原始間隔基序的上游。大多數(shù)商業(yè)化的Cas9酶將PAM基序定位為NGG(任何核苷酸后面都有兩個(gè)鳥(niǎo)嘌呤)。
gRNA與靶基因的結(jié)合是通過(guò)基因組靶序列和gRNA 20個(gè)核苷酸間隔之間的互補(bǔ)堿基配對(duì)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。然后切割基因組脫氧核糖核酸，在聚丙烯酰胺序列后誘導(dǎo)雙鏈斷裂。關(guān)鍵是Cas9不能消化脫氧核糖核酸，除非它與gRNA結(jié)合，從而為系統(tǒng)提供特異性。
編輯過(guò)程是通過(guò)使用內(nèi)源性非同源末端連接(NHEJ)途徑修復(fù)骨折完成的。盡管這種脫氧核糖核酸修復(fù)系統(tǒng)是最有效的修復(fù)方法，但它容易出錯(cuò)，有時(shí)允許小的插入或缺失，這可能會(huì)導(dǎo)致框架移位并減少蛋白質(zhì)產(chǎn)量。如上所述，另一種選擇是通過(guò)提供人力資源模板來(lái)利用內(nèi)源性同源定向修復(fù)(HDR)系統(tǒng)。這在引入目標(biāo)突變時(shí)使用。
